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支原體汙染的影響是什麽?如何應對呢?
點擊次數:35 發布時間:2021-05-06

細胞培養過程中,由於實驗環境、操作者鼻腔口腔、實驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此,細胞發生支原體汙染的頻率很高。據美國數據統計,細胞發生支原體汙染的幾率在70%以上。

同時,由於支原體直徑很小,僅在180nm~350nm之間,隻有通過電鏡才能看到。因此,支原體汙染不易被實驗者肉眼發覺。而支原體汙染是個循序的過程,普通抗生素對其無效。因此,被支原體汙染的細胞會持續受到影響,導致實驗數據不準確。

支原體汙染不僅是細胞培養中需要克服的現象,而且是製藥、生物製品生產中需要加以避免的。支原體汙染的影響是什麽?

 

 

●抑製細胞增殖達50%

●影響免疫反應

●影響病毒增殖和感染率

●引起染色體畸變和易位

●幹擾雜交瘤技術使被汙染細胞在HAT培養基geng敏感

●在細胞壁上附著支原體會改變細胞壁完整性。

●降低電穿孔轉染率達5%

總之,支原體汙染影響細胞所有的代謝功能。

細胞被支原體汙染,解決方案

方法一:確認細胞已被支原體汙染,終止試驗,丟棄所有被汙染的細胞和耗材。

重新複蘇細胞,注意選用未被汙染的細胞株、血清和培養基,並規範操作。

方法二:對於珍貴的,樣品不可再得的細胞,或價格昂貴的種子細胞,不但無法丟棄,而且作為種子細胞,還需要徹底根除支原體汙染。

此時,需選用特異性的支原體殺除劑,清除汙染,保護細胞。

方法三:對於已耗費很多時間,大量擴增起來的細胞,或經過基因轉染、體外刺激等大量工作處理過的細胞,如果發現細胞被支原體汙染了,怎麽辦?此時由於前期工作量巨大,使操作人員無法丟棄已有細胞。

但由於價格原因,又無法使用方法二提到的昂貴試劑殺除細胞上的支原體,

同時,實驗人員還需要清除細胞上的支原體汙染,讓實驗得以往下推進,以蕞終獲得準確的實驗數據。

此時,實驗者可選用對支原體te效的抑製劑,通過對細胞的前期處理,中期加藥,逐步通過4代左右的培養,得以將支原體汙染徹底清除,確保試驗順利推進,結果準確。

工作環境中支原體汙染,解決方案

如果實驗室的細胞經常發生支原體汙染,則需考慮的汙染源可能來以下幾個方麵:

1、細胞種子被汙染,解決方法參見以上“方法二”和“方法三”;

2、細胞培養中,使用未經嚴格過濾祛除支原體的牛血清。

某些血清生產廠,為低價占領市場同時還能獲得充足利潤,他們需要降低生產成本,所以會將生產中,成本蕞高的100nm過濾三次的步驟縮減,導致血清成為支原體的汙染源。

(全球標準的血清生產規範為:粗血清需經七次過濾,蕞後三次為100nm加壓過濾,可以清除支原體);

此情況需詳細考察血清供貨商的專業程度,通過索要《檢測報告》等書麵文件為血清獲得geng多質量保證。同時,對專業水平不高的血清供貨商,適當延長血清試用期。

3、潔淨台、細胞培養箱內部、培養箱水槽、液氮罐,培養間內部的水浴鍋等環境被支原體汙染,可對工作區域進行消毒。

總之,細胞培養中,支原體汙染發生頻繁。有時帶來的危害會造成實驗的巨大損失。應經常檢測和及時排除支原體汙染,讓細胞在健康安全的環境下生長,為獲得準確的實驗結果,打下良好的基礎。

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