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試驗中抗體該如何選擇?
點擊次數:31 發布時間:2021-05-11

當您選擇抗體時,一些有用的建議如下:

通過查閱文獻,查找使用過類似抗體的實驗室進行谘詢;

詢問其他實驗室成員是否已經用過了適合您實驗的抗體;

檢查抗體的克隆性、應用適應性、宿主物種和種屬反應性等各種數據。

查看供應商提供的圖片和數據——數據是否可信、實驗結果優劣鑒定?

參考引用該抗體的任何論文和論文中數據的表現選擇適合自己的抗體。

一抗選擇

01 確認研究用途

研究主題是什麽?

抗體的克隆性質?

02 抗體的種屬?

樣本的種屬來源需要和抗體的種屬來源不同。像western blot這樣的實驗應用,樣本是沒有內源性免疫球蛋白(IgG)的細胞裂解液,或者使用直標一抗的實驗應用,都不用擔心這個問題。

如果不得不需要使用和樣本種屬來源相同的抗體 (如鼠抗鼠的抗體),建議進行抗體定製服務。

03 非模式生物

如果研究對象為非模式生物,並且不得不要用一種在該物種中沒有被測試過的抗體。當然很可能無法得到理想的結果,但是大部分的保守序列蛋白質是可以被一個未經驗證的抗體識別的。

因此,如果沒有很好地選擇,一般建議選擇對目標生物的該蛋白進行序列比對,並且得出該蛋白序列是否足夠保守的結果。(Swiss-Prot蛋白數據庫鏈接中可以找到所需的序列,還有一些網站提供計算相似度的工具,例如多序列比對工具CLUSTALW.)

將抗體的免疫原序列與您想檢測的物種的蛋白序列進行比對,如果重合比對結果重複度大於85%,那麽兩者可能會發生交叉反應效應(即使是比對得分大於85%,也無法完全保證抗體一定會識別)需要使用多個對照來確定該抗體是按您預期與靶標特異地結合。

關於二抗選取的幾個建議:

選擇蕞亮的熒光素來標記表達量蕞低的蛋白質

當您使用多色標記時,所有二抗應該保持物種來源一致

如果您在實驗前用來自和二抗同一宿主物種的血清來封閉樣本,這將顯著降低背景

預吸附二抗 對於多色分析很有用,可確保較低的物種間交叉反應性

片段抗體 更小且可高效得滲入組織(對IHC很有用)

生物素偶聯物可檢測低豐度蛋白

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